第423章 成功

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78_78905多顺反子能和核糖体小亚基上的16srrna的3端富含嘧啶核苷酸的区域配对结合，有助于带有甲酰甲硫氨酸的起始trna识别mrna上的起始密码(aug)，使肽链合成从此开始。这段顺序是1974年由j.夏因和l.达尔加诺发现的，所以称为sd顺序，也称核糖体结合部位。原核生物mrna的编码区一般编码几种功能上相关联的蛋白质，两种蛋白质的编码区之间常有一小段不翻译的顺序，叫做间隔区。

有的噬菌体rna中2个相邻的顺反子共用一段相同的编码顺序，例如，m噬菌体rna中的溶菌蛋白编码区共225个核苷酸中有189个核苷酸是由相邻两个蛋白质共用的。原核mrna与真核mrna一样使用同一套三联体密码子(真核生物线粒体mrna有例外)。原核生物合成氨基酸的操纵子mrna的5端前导顺序上有一段顺序称作弱化子。弱化子具有两种可以互变的构象，其中一种构象是转录终止的信号，能使转录中止(或衰减)。衰减调节是原核生物合成氨基酸的调控方式之一。

真核生物mrna(细胞质中的)一般由5端帽子结构、5端不翻译区、翻译区(编码区多顺反子

多顺反子)、3端不翻译区和3端聚腺苷酸尾巴构成。分子中除g构成帽子外，常含有其他修饰核苷酸，如a等。5端帽子结构通常有3种类型，即:g(5)ppp(5)n;g(5)ppp(5)n和g(5)ppp(5)n。图1b[真核生物mrna结构示意图b5端帽子结构式，表示碱基，表示碱基是帽子的化学结构，n右边的m代表核糖2位羟基的甲基化。真核细胞线粒体中的mrna无帽子结构。一般认为帽子的功能与翻译的启动有关。许多真核生物mrna(如珠蛋白mrna)除去帽子后翻译效率大大降低。5端不翻译区。也叫前导顺序。不同的真核mrna的前导顺序长度不同，有的只有10个核苷酸，有的则有200个核苷酸。与原核mrna相似。真核mrna5端不翻译区中常有一段顺序与核糖体小亚基上的18srrna的3端的一段顺序互补并结合，这种结合与真核mrna的翻译启动有关。

翻译区(编码区)使用的密码子除线粒体(如人、牛和酵母线粒体)外与原核生物mrna是一样的。真核生物mrna的起始密码子都是aug。真核和原核生物mrna使用的密码子也都有‘简并现象‘。即几种不同的密码子翻译出同一种氨基酸，但不同的mrna中简并密码子的利用率是不同的，真核与原核生物之间的差别就更大。mrna的终止密码子有3个(uag、uga和uaa)，其功能是停止翻译，一般只用一个终止密码子就能使翻译停止。有的mrna有2个连续的终止密码子(见)。

3端不翻译区的长短在不同的mrna上有所不同，β珠蛋白mrna只有39个核苷酸，而卵白蛋白mrna则有637个核苷酸。真核生物mrna3端不翻译区常有aauaa(a)或auuua(a)等顺序，它们和识别多聚a聚合酶及装配多聚a尾巴有关。除个别组蛋白mrna外。真核生物mrna3端均有多聚a尾巴3端多聚a尾巴的长度随来源不同而不同，且随mrna的老化而变短，通常有20~200个a多聚a与mrna稳定性及mrna从细胞核转到细胞浆中有关。

多顺反子描述的是一个新型的表达系统，用以从一个单一多顺反子构建体中产生目的多基因产物。尤其是，该表达系统包含一个多顺反子载体，能够在真核宿主细胞中表达功能抗体，其中载体在5′-3′方向上至少包含下面的可操作连接的元件:在真核细胞可操作的启动子;编码至少抗体轻链可变区的dna序列;内部核糖体进入位点(ires);以及至少一个编码抗体重链的dna序列。也公开了包含多顺反子表达载体的哺乳动物细胞，和一种在用多顺反子表达载体转染的哺乳动物细胞中产生功能抗体的方法。

而最后一步，则是在里面找到报告基因。

报告基因是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是说。是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达。从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。

在植物基因工程研究领域，已使用的报告基因有以下几种:胭脂碱合成酶基因(nos)、章鱼碱合成酶基因(ocs)、新霉素磷酸转移酶基因(npt2)、氯霉素乙酰转移酶基因(cat)、庆大霉素转移酶基因、葡萄糖苷酶基因、荧光酶基因等。nos、ocs这两个基因是致瘤土壤农杆菌(s)的ti质粒特有的，对ti质粒进行改造，用相应的致瘤农杆菌转化植物体时，如果外源基因转入植物体中，则这两种报告基因在植物根茎叶中均能表达，不受发育调控，检测时直接用转化体提取液进行纸电泳。染色后在紫外光下观察荧光即可。npt2、cat及庆大霉素转移酶基因，均为抗生素筛选基因。相关的酶可以对底物进行修饰(磷酸化、乙酰化等)，从而使这些抗生素失去对植物生长的抑制作用。使得含有这些抗性基因的转化体能在含这些抗生素的筛选培养基上正常生长，也可以用转化体提取液体，外用同位素标记，放射自显影筛选转化体。常用的一种报告基因是β-d-葡萄糖苷酶基因，该酶催化底物形成β-d-葡萄糖苷酸。它在植物体中几乎无背景，组织化学检测很稳定，可用分光光谱、荧光等进行检测。荧光酶基因(luc)是1985年从北美荧火虫和叩头虫a文库中克隆出来的。该酶在有atp、mg2+、o2和荧光素存在下发出荧光，这样就可用转基因植物整株或部分直接用x-光片或专门仪器进行检测。